Share |

Identification of Major and Minor Allergens of Mud Crab (Scylla Serrata)

Original article

Abstrak

Ketam adalah sumber nutrien berharga iaitu protein dan lipid berfungsi yang diambil secara meluas. Walau bagaimanapun, prevalen alergi terhadap ketam telah meningkat beberapa tahun kebelakangan ini. Dalam usaha untuk lebih memahami alergi terhadap ketam, adalah penting untuk mengenal pasti alergen-alergen ketam. Tujuan kajian ini adalah untuk membandingkan protein pengikat-IgE pada ekstrak ketam lumpur (Scylla serrata) mentah dan yang dimasak. Ekstrak ketam lumpur mentah dah yang dimasak telah disediakan. Profil protein dan corak kereaktifan-IgE telah dikenalpasti dengan menggunakan elektroforesis gel natrium dodesil sulfat berpoliakrilamida (SDS-PAGE), diikuti dengan pemblotan imuno menggunakan serum daripada 21 orang pesakit yang positif dalam ujian cucuk kulit (SPT). Dalam SDS-PAGE, sebanyak 20 jalur protein (12 hingga 250 kDa) telah diperhatikan dalam ekstrak ketam mentah manakala ekstrak yang dimasak menunjukkan sedikit jalur. Jalur protein antara 40 hingga 250 kDa adalah sensitif terhadap penyahaslian haba dan tidak dapat diperhatikan lagi dalam ekstrak yang dimasak. Dalam eksperimen pemblotan imuno, ekstrak mentah dan yang dimasak masing-masing menunjukkan 11 dan 4 protein pengikat-IgE, dengan berat molekul antara 23 dan 250 kDa. Protein 36 kDa yang tahan haba, yang sepadan dengan tropomiosin ketam telah dikenal pasti sebagai alergen major pada kedua-dua ekstrak. Sebagai tambahan, protein 41 kDa yang sensitif haba yang dipercayai adalah arginine kinase telah dikenal pasti sebagai alergen major dalam ekstrak mentah. Alergen minor yang lain juga telah diperhatikan pada pelbagai berat molekul.

Abstract

Crab meat is a valuable source of proteins and functional lipids and is widely consumed worldwide. However, the prevalence of crab allergy has increased over the past few years. In order to better understand crab allergy, it is necessary to identify crab allergens. The aim of the present study was to compare the IgE-binding proteins of raw and cooked extracts of mud crab (Scylla serrata). Raw and cooked extracts of the mud crab were prepared. Protein profiles and IgE reactivity patterns were identified by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) followed by immunoblotting using sera from 21 skin prick test (SPT) positive patients. In SDS-PAGE, 20 protein bands (12 to 250 kDa) were observed in the raw extract while the cooked extract demonstrated fewer bands. Protein bands between 40 to 250 kDa were sensitive to heat denaturation and no longer observed in the cooked extract. In immunoblotting experiments, raw and cooked extracts demonstrated 11 and 4 IgE-binding proteins, respectively, with molecular weights of between 23 and 250 kDa. A heat-resistant 36 kDa protein, corresponding to crab tropomyosin was identified as the major allergen of both extracts. In addition, a 41 kDa heat-sensitive protein believed to be arginine kinase was shown to be a major allergen of the raw extract. Other minor allergens were also observed at various molecular weights.